小鼠皮肤冷冻包埋实验

简介

对皮肤的冷冻切片进行油红 0 染色可以分析皮脂腺的油脂分泌功能和皮下脂肪层的形态，常用于小鼠皮肤炎症及皮脂腺相关研究。

材料与仪器

器材：液氮、铝箔、解剖工具、小鼠等试剂：① 多聚甲醛（Sigma-Aldrich）② 冷冻包埋剂步骤

小鼠皮肤冷冻包埋实验的基本过程可分为如下几步：A. 对小鼠处以安乐死后，从背部剪下方形皮肤组织，将该皮肤贴到干净的滤纸上，用至少 20 倍体积的 4％ 多聚甲醛固定过夜（20 小时，＜ 24 小时）。注意：把皮肤贴到滤纸上时，用镊子轻轻把皮肤展开，既不要留下皱褶，也不要太用力拉扯而使组织结构变形。B. 将固定好的皮肤放入装有蒸馏水的 50 ml 试管中进行清洗，清洗过程中可以将试管放于脱色摇床上，用较低的速度轻轻摇动约 30 分钟。C. 将清洗完毕的皮肤放入至少 20 倍皮肤体积的 30％ 的蔗糖溶液（溶于 PB）中，放置于 4 ℃，直到组织下沉到管底。D. 将铝箔叠成小槽子，加入适量冷冻包埋剂。将皮肤组织从蔗糖溶液中取出，先用包埋剂包裹润湿两遍，以去掉原来的水相，再把组织放入小槽子，调整好方向。E. 马上小心地把小槽子的底部浸入预先准备好的液氮中，注意不要使组织的方向改变。等包埋剂凝固后，把组织块保存在 -20 ℃ 或 -80 ℃。切片可用于油红染色或免疫荧光。注意事项

1. 固定液的选择应该根据具体的实验要求确定。多聚甲醛是很常用的固定液，适合进行免疫组化，免疫荧光等方面的实验；如果只是进行形态的观察（HE 染色），可以选用 Bouin 固定液；如果要进行电镜分析的小体积样品，则建议采用戊二醛进行固定。2. 当组织在蔗糖溶液中刚沉下时，即可包埋。3. 包埋时要用细镊子小心调整包埋方向，以便今后切片能切到完整的毛囊。来源：丁香实验